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中华移植杂志(电子版)

中华移植杂志(电子版) ›› 2024, Vol. 18 ›› Issue (05) : 278 -282. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-3903.2024.05.004

论著

白果内酯对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用研究
唐亦骁1, 陈峻1, 连正星1, 胡海涛1, 鲁迪2,3,4, 徐骁2,3,4, 卫强1,2,3,4,†()   
  1. 1.310006 杭州，浙江中医药大学第四临床医学院
    2.310014 杭州，浙江省人民医院肝胆胰外科，微创外科
    3.310053 杭州，杭州医学院临床医学院
    4.310003 杭州，浙江大学器官移植研究所
  • 收稿日期:2024-03-11 出版日期:2024-10-25
  • 通信作者: 卫强
  • 基金资助:
    浙江省医药卫生科技计划-省部共建重点项目（WKJ-ZJ-2120）浙江省科技厅“尖兵”“领雁”研发攻关计划（2022C03108）国家重点研发计划（2021YFA1100500）

Study on the protective effect of bilobalide on hepatic ischemia-reperfusion injury in mice

Yixiao Tang1, Jun Chen1, Zhengxing Lian1, HaiTao Hu1, Di Lu2,3,4, Xiao Xu2,3,4, Qiang Wei1,2,3,4,†()   

  1. 1.Fourth School of Clinical Medicine， Zhejiang Chinese Medicine University， Hangzhou 310006， China
    2.Department of Hepatobiliary & Pancreatic Surgery and Minimally Invasive Surgery，Zhejiang Provincial People′s Hospital， Affiliated People′s Hospital， Hangzhou Medical College， Hangzhou 310014， China
    3.School of Clinical Medicine， Hangzhou Medical College， Hangzhou 310053， China
    4.Institute of Organ Transplantation， Zhejiang University， Hangzhou 310003， China
  • Received:2024-03-11 Published:2024-10-25
  • Corresponding author: Qiang Wei
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引用本文：

唐亦骁, 陈峻, 连正星, 胡海涛, 鲁迪, 徐骁, 卫强. 白果内酯对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用研究[J/OL]. 中华移植杂志(电子版), 2024, 18(05): 278-282.

Yixiao Tang, Jun Chen, Zhengxing Lian, HaiTao Hu, Di Lu, Xiao Xu, Qiang Wei. Study on the protective effect of bilobalide on hepatic ischemia-reperfusion injury in mice[J/OL]. Chinese Journal of Transplantation(Electronic Edition), 2024, 18(05): 278-282.

目的

观察白果内酯对肝缺血再灌注损伤（HIRI）小鼠肝脏的保护作用并探讨其机制。

方法

按随机数字表法将40只雄性C57BL/6小鼠分为4组：假手术组、HIRI组、HIRI+白果内酯组（HIRI+BB组）和HIRI+N-乙酰半胱氨酸组（HIRI+NAC组），每组各10只。通过使用无损伤血管夹阻断小鼠入肝血流90 min后松开血管夹使肝血流复灌6 h的方法，建立小鼠HIRI模型。检测小鼠外周血ALT、AST浓度，HE染色观察肝脏病理变化，TUNEL法评估肝细胞凋亡，免疫荧光染色检测肝组织中性粒细胞、巨噬细胞浸润及cleaved caspase-3表达，用ELISA试剂盒检测肝组织中TNF-α、IL-1β表达。组间比较采用单因素方差分析，并用Duncan法进行两两比较。P＜0.05为差异具有统计学意义。

结果

HIRI+BB组小鼠血清ALT、AST分别为（455.0±64.1）和（508.3±72.7）U/L，均低于HIRI组［（8 658.5±334.6）和（5 708.1±357.7）U/L］，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。HE染色后HIRI+BB组小鼠肝组织Suzuki评分低于HIRI组、HIRI+NAC组［（3.7±0.3）、（7.5±0.7）和（5.9±0.4）分］，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。此外，HIRI+BB组与HIRI组相比，每400倍镜视野下中性粒细胞［（61.4±5.3）和（166.0±32.2）个］、巨噬细胞［（198.0±10.7）和（305.4±20.3）个］在肝组织中浸润更少，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。HIRI+BB组较HIRI组TNF-α［（12 190.4±1 424.2）和（25 283.1±2 596.6）pg/mL］、IL-1β［（13 275.8±1 764.1）和（32 526.3±4 777.8）pg/mL］炎症因子表达更少，差异均有统计学意义（P＜0.05）。TUNEL法显示每200倍镜视野下HIRI+BB组小鼠肝细胞内肝细胞凋亡较HIRI组减少［（2.5±0.4）和（259.7±9.2）个］，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论

白果内酯通过减少细胞凋亡和抑制炎症反应减轻小鼠HIRI。

关键词: 白果内酯, 肝缺血再灌注损伤, 小鼠, 凋亡, 炎症反应

Objective

To investigate the protective effect of resveratrol on the liver in mice subjected to hepatic ischemia-reperfusion injury （HIRI） and elucidate its mechanism.

Methods

Forty male C57BL/6 mice were randomly divided into four groups （10 mice per group） by random number table method：Sham group， HIRI group， HIRI+bilobalide group （HIRI+BB group）， and HIRI+N-acetylcysteine group （HIRI+NAC group）. The HIRI mice model was established by clamping the portal vein to block hepatic blood flow for 90 min and then reperfusing the liver for 6 h after releasing the clamp. Serum ALT and AST levels were measured， liver pathology was observed using HE staining，liver cell apoptosis was assessed by TUNEL assay， neutrophil and macrophage infiltration as well as cleaved caspase-3 expression in liver tissue were detected by immunofluorescence， and TNF-α and IL-1β levels in liver tissue were measured using ELISA kits. One-way ANOVA was used for comparison among groups， and Duncan's test was applied for pairwise comparisons. P＜0.05 was considered statistically significant.

Results

The serum ALT and AST levels in the HIRI+BB group were （455.0±64.1） and （508.3±72.7） U/L， respectively， both of which were significantly lower than those in the HIRI group ［（8 658.5±334.6） and （5 708.1±357.7）U/L， respectively）］， with statistically significant differences （all P＜0.05）. HE staining showed that the Suzuki score of liver tissue in the HIRI+BB group was lower than that in the HIRI group ［（3.7±0.3） and （7.5±0.7） points， P＜0.05］， and it was also lower than that in the HIRI+NAC group ［（3.7±0.3） and （5.9±0.4） points， P＜0.05］. Additionally， compared with the HIRI group， the infiltration of neutrophils and macrophages in the liver tissue of the HIRI+BB group was significantly reduced under a 400×microscope field ［（61.4±5.3） and （166.0±32.2）， （198.0±10.7） and （305.4±20.3） respectively， all P＜0.05］. Moreover， the expression of inflammatory factors TNF-α and IL-1β in the HIRI+BB group were significantly lower than in the HIRI group ［（12 190.4±1 424.2） and （25 283.1±2 596.6） pg/mL， （13 275.8±1 764.1） and （32 526.3±4 777.8） pg/mL， all P＜0.05］.TUNEL assay revealed that the number of apoptotic liver cells in the HIRI+BB group was significantly lower than in the HIRI group under a 200× microscope field ［（2.5±0.4） and （259.7±9.2）， P＜0.05］.

Conclusion

Bilobalide mitigates HIRI by reducing cell apoptosis and inhibiting the inflammatory response.

Key words: Bilobalide, Hepatic ischemia-reperfusion injury, Mice, Apoptosis, Inflammatory response
表1 Suzuki标准评分表
数值评估（分） 肝窦淤血 细胞空泡化 细胞坏死
0 无 无 无
1 极少 极少 单个细胞坏死
2 轻度 轻度 ＜30%细胞坏死
3 中度 中度 30%～60%细胞坏死
4 重度 重度 ＞60%细胞坏死
表2 各组小鼠血清肝功能结果（U/L，）
组别 只数 ALT AST
假手术组 10 67.4±15.2 112.1±11.7
HIRI组 10 8 658.5±334.6a 5 708.1±357.7a
HIRI+BB组 10 455.0±64.1ab 508.3±72.7ab
HIRI+NAC组 10 3 406.9±583.4abc 2 573.7±366.9abc
图1 各组小鼠肝组织HE染色结果（×40，×200） 注：HIRI. 肝缺血再灌注损伤；BB. 白果内酯；NAC. N-乙酰半胱氨酸；黑色箭头示炎性细胞浸润，绿色箭头示坏死的肝细胞，黄色箭头示肝血窦淤血
表3 各组小鼠肝组织Suzuki标准评分（分，）
组别 只数 Suzuki标准评分
假手术组 10 2.5±0.3
HIRI组 10 7.5±0.7a
HIRI+BB组 10 3.7±0.3b
HIRI+NAC组 10 5.9±0.4abc
图2 各组小鼠肝组织TUNEL染色结果（×40，×200） 注：HIRI. 肝缺血再灌注损伤； BB. 白果内酯； NAC. N-乙酰半胱氨酸
图3 各组小鼠肝组织cleaved-caspase 3表达水平（×400）
表4 各组小鼠肝细胞凋亡结果（个，）
组别 只数 TUNEL阳性细胞数
假手术组 10 0.3±0.2
HIRI组 10 259.7±9.2a
HIRI+BB组 10 2.5±0.4b
HIRI+NAC组 10 93.5±11.0abc
图4 各组小鼠肝组织Ly6G染色中性粒细胞浸润水平（×400）
图5 各组小鼠肝组织F4/80染色巨噬细胞浸润水平（×400）
表5 各组小鼠肝组织炎症因子表达结果（pg/mL，）
只数 TNF-α IL-1β
假手术组 10 211.6±25.9 151.6±19.6
HIRI组 10 25 283.1±2 596.6a 32 526.3±4 777.8a
HIRI+BB组 10 12 190.4±1 424.2ab 13 275.8±1 764.1ab
HIRI+NAC组 10 247.5±38.0bc 205.8±27.4bc
表6 各组小鼠肝组织炎性细胞浸润结果（个，）
组别 只数 中性粒细胞 巨噬细胞
假手术组 10 2.7±0.7 73.3±8.9
HIRI组 10 166.0±32.2a 305.4±20.3a
HIRI+BB组 10 61.4±5.3ab 198.0±10.7ab
HIRI+NAC组 10 22.6±2.1b 116.2±6.3
1
Liu J， Man K. Mechanistic insight and clinical implications of ischemia/reperfusion injury post liver transplantation［J］. Cell Mol Gastroenterol Hepatol， 2023， 15（6）：1463-1474.
2
Dossi CG， Vargas RG， Valenzuela R， et al. Beneficial effects of natural compounds on experimental liver ischemia-reperfusion injury［J］. Food Funct， 2021， 12（9）：3787-3798.
3
Lu J， Xie L， Liu K， et al. Bilobalide：a review of its pharmacology，pharmacokinetics， toxicity， and safety［J］. Phytother Res， 2021， 35（11）：6114-6130.
4
Song W， Chen Z， Zhang M， et al. Bilobalide prevents apoptosis and improves cardiac function in myocardial infarction［J］. Mol Biotechnol， 2024， 66（3）：442-453.
5
Defeudis FV. Bilobalide and neuroprotection［J］. Pharmacol Res，2002， 46（6）：565-568.
6
Suzuki S， Toledo-Pereyra LH， Rodriguez FJ， et al. Neutrophil infiltration as an important factor in liver ischemia and reperfusion injury. Modulating effects of FK506 and cyclosporine［J］.Transplantation， 1993， 55（6）：1265-1272.
7
Wang C， Chen K， Xia Y， et al. N-acetylcysteine attenuates ischemia-reperfusion-induced apoptosis and autophagy in mouse liver via regulation of the ROS/JNK/Bcl-2 pathway［J］. PLoS One，2014， 9（9）：e108855.
8
Ye L， He S， Mao X， et al. Effect of hepatic macrophage polarization and apoptosis on liver ischemia and reperfusion injury during liver transplantation［J］. Front Immunol， 2020， 11：1193.
9
Zhai Y， Busuttil RW， Kupiec-Weglinski JW. Liver ischemia and reperfusion injury：new insights into mechanisms of innate-adaptive immune-mediated tissue inflammation［J］. Am J Transplant， 2011，11（8）：1563-1569.
10
Luo S， Luo R， Deng G， et al. Programmed cell death， from liver Ischemia-Reperfusion injury perspective：an overview［J］. Heliyon，2024， 10（13）：e32480.
11
Oliveira THC， Marques PE， Proost P， et al. Neutrophils：a cornerstone of liver ischemia and reperfusion injury［J］. Lab Invest，2018， 98（1）：51-62.
[1] 钟雅雯, 王煜, 王海臻, 黄莉萍. 肌苷通过抑制线粒体通透性转换孔开放缓解缺氧/复氧诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡[J/OL]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2024, 20(05): 525-533.
[2] 孙鸿坤, 艾虹, 陈正. 内质网应激介导的牙周炎骨改建失衡的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(04): 211-218.
[3] 廖泽楷, 梁爱琳, 龚启梅. 根尖周病中程序性细胞死亡的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(03): 150-155.
[4] 刘炯, 彭乐, 马伟, 江斌. 鞘外解剖肝蒂技术治疗肝内胆管细胞癌的疗效评估[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2024, 18(04): 373-376.
[5] 王东阳, 林琳, 娄熙彬. SII对局部进展期胃癌nCRT＋腹腔镜胃癌根治术后并发症及预后的影响研究[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2024, 18(03): 315-318.
[6] 郑俊, 吴杰英, 谭海波, 郑安全, 李腾成. EGFR-MEK-TZ三联合分子的构建及其对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(05): 503-508.
[7] 胡思平, 熊性宇, 徐航, 杨璐. 衰老相关分泌表型因子在前列腺癌发生发展中的作用机制[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(05): 425-434.
[8] 李勇, 彭天明, 王倩倩, 陈育纯, 蒲小勇, 刘久敏. 基于失巢凋亡相关基因的膀胱癌预后模型构建及分析[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(04): 331-339.
[9] 李智, 冯芸. NF-κB 与MAPK 信号通路及其潜在治疗靶点在急性呼吸窘迫综合征中的研究进展[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2024, 17(05): 840-843.
[10] 黄程鑫, 陈莉, 刘伊楚, 王水良, 赖晓凤. OPA1 在乳腺癌组织的表达特征及在ER阳性乳腺癌细胞中的生物学功能研究[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(05): 275-284.
[11] 季加翠, 孙春斌, 罗恩丽. 姜黄素通过调节NF-κB/NLRP3通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(04): 193-203.
[12] 杜霞, 马梦青, 曹长春. 造影剂诱导的急性肾损伤的发病机制及干预靶点研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 279-282.
[13] 王国强, 张纲, 唐建坡, 张玉国, 杨永江. LINC00839 调节miR-17-5p/WEE1 轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响[J/OL]. 中华消化病与影像杂志(电子版), 2024, 14(06): 491-499.
[14] 靳英, 付小霞, 陈美茹, 袁璐, 郝力瑶. CD147调控MAPK信号通路对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(05): 474-480.
[15] 刘霖, 张文欢, 宋雅茹, 姜云璐. Apelin-13 在阿尔茨海默病中的神经保护作用机制研究进展[J/OL]. 中华诊断学电子杂志, 2024, 12(04): 276-280.
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